RESUMO
Abstract Fetal bovine serum (FBS) is the most used supplement in culture media; however, it may interfere with in vitro assays via effects on cell proliferation and cytokine production. The ideal FBS concentration for assays using apical papilla cells (APCs) remains unknown. Therefore, this study aimed to evaluate the effects of FBS on APC activation, cell viability/proliferation, and cytokine production. Methodology Human APCs were cultured, plated, and maintained in media containing increasing concentrations of FBS for 24 h, 48 h, 72 h, 7 days, and 14 days in the presence of Lipopolysaccharide (LPS - 1 µg/mL). At each time point, the cells were subjected to the MTT assay. The cytokines transforming growth factor (TGF)-β1, osteoprotegerin (OPG), and interleukin (IL)-6, along with the chemokine CCL2, were quantified using the enzyme-linked immunosorbent assay at the 24-h time-point. Statistical analysis was performed using two-way analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey's post-hoc test (p<0.05). Results In general, APCs exhibited increasing metabolic activity in an FBS concentration-dependent fashion, regardless of the presence of LPS. In contrast, FBS interfered with the production of all the cytokines evaluated in this study, affecting the response induced by the presence of LPS. Conclusion FBS increased APC metabolism in a concentration-dependent manner and differentially affected the production of TGF-β1, OPG, IL-6, and CCL2 by APCs in vitro.
RESUMO
As células necróticas são capazes de induzir a instalação de processos inflamatórios importantes, mesmo em ambientes estéreis, e o papel de remanescentes necróticos pulpares ainda não é conhecido na periodontite apical. O objetivo deste estudo foi investigar a capacidade de modulação in vitro de fibroblastos do ligamento periodontal (FLP) pelo sobrenadante necrótico (SN) de polpa dental. Cultura de fibroblastos de polpa dental (FPD) (n=1) e de ligamento periodontal (n=1) foram obtidas a partir do biobanco. Os FPDs passaram por ciclos de congelamento/descongelamento e o SN submetido a diluições 1/2, 1/10 e 1/20. Os FLPs foram estimulados com o SN de FPD. Para avaliar se o SN interfere na viabilidade celular do FLP foi realizado o ensaio de alamarBlue nos períodos de 24h, 48h e 72h. Nos grupos 24h, 48h e 72h não se observou diferença estatisticamente significativa. Porém, foi notado que no grupo de 72h o tratamento com SN resultou em uma maior ativação celular nas concentrações 1/10 e 1/20 em relação ao controle (p<00,5). O ensaio de MTT avaliou o efeito do SN na viabilidade celular do FLP. No grupo de 24h o SN resultou em uma ativação celular expressiva nas concentrações 1/2, 1/10 e 1/20 em relação ao controle. Nos grupos 48h e 72h não houve diferença estatisticamente significativa (p< 0,05). Os FLPs foram tratados com SN de FPD para avaliar os efeitos da produção de citocinas. A produção de OPG se apresentou maior no grupo com diluição 1/2 em comparação com as demais (p<0,05). A IL-6 apresentou-se aumentada no grupo com menor diluição e reduzida nos grupos com SN mais diluído (p<0,05). A expressão de CCL2 demonstrou-se menor nos grupos com diluição 1/10 e 1/20 (p<0,05). Diante desses resultados, observou-se que o sobrenadante de fibroblastos de polpa dental foi capaz de ativar células de ligamento periodontal in vitro modulando a produção de OPG, IL-6 e CCL2 de forma diluição-dependente.